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產(chǎn)品詳情
基因編輯細胞系原理
CRISPR/Cas9系統(tǒng)的原理是利用gRNA特異性識別靶序列，并引導(dǎo)Cas9核酸內(nèi)切酶對靶序列的PAM上游進行切割，從而造成靶位點DNA雙鏈斷裂，隨之利用細胞的非同源末端連接（NHEJ）或同源重（HDR）的方式對切割位點進行修復(fù)，實現(xiàn)DNA水平的基因敲除、敲入或點突變。
基因敲除細胞系
通過病毒法，化學(xué)轉(zhuǎn)染法或電轉(zhuǎn)法將gRNA和Cas9轉(zhuǎn)入細胞中，根據(jù)轉(zhuǎn)染方法不同進行不同時長的藥篩，藥篩完成后挑選單克隆培養(yǎng)。選擇不同的克隆分別進行靶位點擴增及測序驗證，篩選出移碼基因敲除的陽性克隆。
常見基因敲除細胞系類型
敲除方案：
萬物生物根據(jù)客戶需求，結(jié)合靶基因的情況進行基因敲除方案設(shè)計。
一、小片段敲除方案
gRNA設(shè)在外顯子2兩端的內(nèi)含子中，敲除外顯子編碼堿基數(shù)為非3倍數(shù)，敲除后可造成移碼；
二、移碼敲除方案
gRNA設(shè)在外顯子上，缺失的堿基數(shù)為非3倍數(shù)，敲除后可發(fā)生移碼突變；
三、大片段敲除方案
將整個基因的編碼序列敲除，達到大片段敲除的效果。
服務(wù)流程
